Plásmido Doble Nickase (m) Thy-1/CD90: sc-423390-NIC

Thy1 codifica la glicoproteína de superficie Thy-1/CD90 anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI), un marcador conservado de neuronas, fibroblastos, células estromales mesenquimales y subpoblaciones de células T en el ratón. Thy-1 participa en interacciones célula–célula y célula–matriz mediante socios de unión como integrinas y sindecanos, influyendo en la dinámica de las adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto y la mecanotransducción. A través de estos procesos modula el crecimiento de neuritas, la guía axonal y la activación de células inmunitarias, vinculando la señalización de Thy-1 con la remodelación tisular y señales inflamatorias. La expresión desregulada de Thy-1 se ha asociado con activación estromal tipo fibrótica, neuroinflamación y fenotipos del microambiente tumoral, lo que la hace relevante para estudios de señalización dependiente de la adhesión e identidad de linaje.

Thy-1/CD90 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Thy1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Thy1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Thy1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Thy1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.