Plásmido CRISPR de Activación (h) Thy-1/CD90: sc-400608-ACT

THY1 codifica la glicoproteína de superficie Thy-1/CD90 anclada a glicosilfosfatidilinositol, un regulador de las interacciones célula–célula y célula–matriz que modula la adhesión, la migración y la organización del citoesqueleto. A través de interacciones con integrinas y componentes de la matriz extracelular, Thy-1/CD90 influye en la dinámica de las adhesiones focales y en las vías de mecanotransducción asociadas a los estados de activación celular. Se utiliza ampliamente como marcador de linaje y de activación en contextos estromales, endoteliales e inmunitarios, y su expresión se estudia con frecuencia en procesos que incluyen la remodelación tisular y la fibrosis, la neuroinflamación y el crecimiento de neuritas, y la señalización del microambiente tumoral. La expresión desregulada de THY1 se ha asociado con patobiología inflamatoria y fibrótica, así como con una comunicación estroma–inmunidad alterada en la biología del cáncer.

Thy-1/CD90 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de THY1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Thy-1/CD90 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus THY1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional THY1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Thy-1/CD90. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo THY1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Thy-1/CD90 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Thy-1/CD90 en células tumorales con expresión de THY1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.