Plásmido Doble Nickase (h) Thrombospondin 5: sc-402797-NIC

COMP codifica la trombospondina 5, una glicoproteína pentamérica secretada de la matriz extracelular, abundante en el cartílago y otros tejidos conectivos. La trombospondina 5 participa en el ensamblaje y la homeostasis de la matriz al unirse a colágenos, proteoglicanos e integrinas, influyendo así en la adhesión de los condrocitos, la mecanotransducción y la organización de la matriz extracelular. A través de sus efectos sobre la arquitectura del cartílago y procesos relacionados con la osificación endocondral, COMP se vincula con vías que regulan el desarrollo esquelético y la integridad tisular. La alteración genética o la desregulación de COMP se asocia con displasias esqueléticas hereditarias y fenotipos de degeneración del cartílago, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudiar la biología de la matriz extracelular y los mecanismos de enfermedad del tejido conectivo.

Thrombospondin 5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COMP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COMP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COMP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COMP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.