Thrombospondin 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402797

概要

COMPは、軟骨や腱に高発現し、マトリックスの組み立てと組織の生体力学的特性を支える五量体の細胞外マトリックス糖タンパク質であるトロンボスポンジン5をコードします。トロンボスポンジン5は、コラーゲン、プロテオグリカン、細胞表面受容体と相互作用し、軟骨細胞の接着、メカノトランスダクション、細胞外マトリックスの構築を調節します。また、コラーゲン線維形成やマトリックスのターンオーバー経路に影響を与えることで、骨格の発生および関節の健全性を形作る軟骨恒常性に寄与します。COMP機能やマトリックス沈着の異常は、遺伝性の骨格異形成や変性軟骨表現型と関連しており、筋骨格系の細胞外マトリックス生物学を研究するうえで有用な注目因子となります。

Thrombospondin 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOMP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COMP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COMPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Thrombospondin 5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Thrombospondin 5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COMP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Thrombospondin 5の機能に不可欠なCOMPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COMPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Thrombospondin 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびThrombospondin 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COMP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Thrombospondin 5 HDRプラスミド（h）および Thrombospondin 5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOMPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOMP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。