Thrombin R CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420264

概要

F2rは、トロンビン受容体（プロテアーゼ活性化受容体1：PAR1）をコードする。PAR1はGPCRであり、トロンビン依存的なプロテオリティック切断によって活性化され、その結果露出するテザードリガンドが受容体を自己活性化し、Gαq、Gα12/13、Gαi経路を介した細胞内シグナル伝達を開始する。マウス細胞では、トロンビン受容体は血小板および内皮の応答、血管トーン、バリア機能、炎症シグナルを、下流のMAPK/ERK、RhoA/ROCK、PLCβを介したCa²⁺動員、ならびにNF-κB関連の転写プログラムを通じて制御する。F2r活性は、凝固と組織損傷および止血ストレスに対する細胞応答を統合し、血栓—炎症のクロストークや血管リモデリングに影響を与える。PAR1シグナルの制御不全は、血栓症、動脈硬化、敗血症関連の血管機能障害、ならびに微小環境における腫瘍—間質相互作用のモデルと関連づけられており、血管・炎症性疾患の病態メカニズム研究において重要である。

Thrombin R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるF2r遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、F2r内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、F2rのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Thrombin Rタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Thrombin Rシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、F2r欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Thrombin Rの機能に不可欠なF2rエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、F2rゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Thrombin R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびThrombin R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、F2r遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Thrombin R HDRプラスミド（m）および Thrombin R HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはF2rホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のF2r標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。