TGIF CRISPR プラスミド (m)

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- 対象種： mouse; human対応製品につきまして、TGIF CRISPR Plasmids (h)をチェックして下さい。
- CRISPR/Cas9 KOプラスミドは、GeCKO (v2) libraryに由来するTGIF-20ntのガイドRNAから構成されます。
- gRNAシークエンスは、ゲノムDNA中の部位特異的な二本鎖切断（DSB）を誘導するためにCas9蛋白質を指示します。
- ターゲット特異的なCRISPRノックアウト及び activationプラスミドを提供しています。詳しい製品情報につきまして、以下のタブをご覧ください。
- 遺伝子ノックアウトまたは活性化効果は、TGIF 抗体 (H-1): sc-17800によって検定されることができます。
- 全製品はトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNAとして提供します。ただし、トランスフェクション困難な細胞との使用のため、Lentiviral Activation Particlesはレンチウイルス粒子に前もって包装されました。

Gene情報

動物種	遺伝子名	Gene ID	Chromosome Location	Isoform (mRNA) Accession #	Protein Accession #	OMIM™ Number
Mouse	Tgif1	21815	17 E1.3	XM_006524031, XM_006524032, XM_011246363, NM_001164074, NM_001164075, NM_001164076, NM_001164077, NM_009372	P70284	N/A

説明

20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
TGIF CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド (m)はCas9　nucleaseと最大な効率のために設計されるターゲット特異的な20ntガイドRNA（gRNA）をエンコード化した3つのプラスミドのプールから構成されます。
gRNAシークエンスは、GeCKO (v2) libraryに由来して、ゲノムDNA中の部位特異的な二本鎖切断（DSB）を誘導するためにCas9蛋白質を指示します。
Cas9誘発されたDSBを含める細胞選択のため、TGIF HDRプラスミド (m) (sc-423373-HDR)と同時にトランスフェクション（co-transfection）をお勧めいたします。
トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TGIF 抗体 (H-1): sc-17800

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説明

20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
TGIF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m)と同時にトランスフェクション（co-transfection）するため、TGIF HDRプラスミド (m)をお勧めいたします。
TGIF HDRプラスミド (m)は、2－3種のプラスミドのプールから構成され、対応するTGIF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m)によって切られたサイトと一致している相同組換え修復 (HDR) テンプレートを含みます。
各HDRプラスミドは、Cas9誘発される二本鎖DNA切断部位の周囲にゲノムDNAに特異的に結合するため、2つの800 bpの相同アームを含みます。
各HDRプラスミドは安定したノックアウト（KO）細胞の選択を可能にするためのピューロマイシン耐性遺伝子、および視覚的にトランスフェクションを確認するためのRFP（赤色蛍光タンパク質）遺伝子を挿入します。
Cre Vector sc-418923によるさらなる処理を可能にするため、各ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子は、2つのLoxPサイトが側面に並んでいます。

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20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
TGIF Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
TGIF Double Nickaseプラスミド (m2)によってコードするペアリングgRNAsはTGIF Double Nickaseプラスミド (m)のペアリングgRNAsと異なります。
トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TGIF 抗体 (H-1): sc-17800

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20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
TGIF CRISPR Activationプラスミド (m)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
TGIF CRISPR Activationプラスミド (m)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
トランスフェクションの後、遺伝子活性化効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TGIF 抗体 (H-1): sc-17800

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200 µl のトランスフェクション準備済み、高力価な CRISPR/dCas9 Lentiviral Activation Particles
TGIF Lentiviral Activation Particles (m)は、細胞のレンチウイルストランスダクションを経由して、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
TGIF Lentiviral Activation Particles (m)は、以下のSAM Activation elementsを含めます：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A and H840A)をコード化したのプラスミド、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド、目標特異的な20ntガイドRNA（gRNA）をコード化したのプラスミド。ブラストサイジン、ハイグロマイシンおよびピューロマイシン耐性遺伝子も含めます。
導入の際に、SAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
TGIF Lentiviral Activation Particles (m2)のガイドRNAはTGIF Lentiviral Activation Particles (m)のガイドRNAと異なる標的特異的な20 ntのガイドRNAをコードします。
トランスフェクションの後、遺伝子活性化効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TGIF 抗体 (H-1): sc-17800

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