Plasmide Double Nickase (h) TGF beta Receptor 2/TGFBR2: sc-400144-NIC

TGFBR2 code pour le récepteur 2 du transforming growth factor bêta (TGF-βR2), une sérine/thréonine kinase transmembranaire qui se lie aux ligands TGF-β et initie la signalisation canonique SMAD2/3 via la phosphorylation de TGFBR1, ainsi que des interactions avec les voies MAPK, PI3K/AKT et celles de la famille Rho. Par l’intermédiaire de ces réseaux, TGF-βR2 régule la transition épithélio-mésenchymateuse, le contrôle du cycle cellulaire, la modulation immunitaire et l’homéostasie de la matrice extracellulaire, contribuant ainsi au développement des tissus et à la réparation des plaies. Une altération de la fonction ou de l’expression de TGFBR2 perturbe la fidélité de la voie et est associée à une dérégulation des programmes de fibrose et à des processus oncogéniques, notamment des modifications de l’inhibition de la croissance, de l’invasion et de la signalisation du microenvironnement tumoral. Comme la signalisation TGF-β dépend fortement du contexte, TGFBR2 est fréquemment étudié afin de disséquer les réponses transcriptionnelles spécifiques des types cellulaires et le contrôle par rétroaction au sein des circuits de cytokines et de réponse au stress.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TGFBR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TGFBR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TGFBR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TGFBR2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.