Plasmide CRISPR d'Activation (h) TGF beta Receptor 1/TGFBR1: sc-400153-ACT

TGFBR1 (récepteur 1 du TGF bêta ; ALK5) code une kinase sérine/thréonine transmembranaire qui sert de récepteur central des ligands du TGF-β. Après liaison du ligand et formation d’un complexe avec TGFBR2, TGFBR1 propage la signalisation canonique SMAD2/3 et interagit avec des voies non canoniques telles que MAPK, PI3K/AKT et les GTPases de type Rho afin de réguler la transition épithélio-mésenchymateuse, le remodelage de la matrice extracellulaire, le contrôle du cycle cellulaire et la modulation immunitaire. Une signalisation TGFBR1 dérégulée est impliquée dans la fibrose, des réponses inflammatoires aberrantes et la biologie du microenvironnement tumoral, où des modifications dépendantes du contexte de la sortie de voie peuvent altérer le contrôle de la croissance et la plasticité cellulaire. En tant que nœud de signalisation en amont, TGFBR1 est largement étudié pour son rôle dans la mise en place des patrons du développement, l’homéostasie tissulaire et les interactions entre voies qui façonnent les programmes transcriptionnels.

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGFBR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGFBR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGFBR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGF beta Receptor 1/TGFBR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGFBR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGF beta Receptor 1/TGFBR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGF beta Receptor 1/TGFBR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGFBR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.