TGFβ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400496

Visão geral

TGFB2 codifica o fator de crescimento transformador beta 2 (TGFβ2), uma citocina secretada que sinaliza por meio de quinases serina/treonina dos receptores de TGF-β para ativar a transcrição dependente de SMAD2/3 e interagir com vias não canônicas, como MAPK, PI3K/AKT e GTPases do tipo Rho. O TGFβ2 é um regulador-chave da remodelação da matriz extracelular, da transição epitélio–mesenquimal, da modulação imune e de decisões de destino celular durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A desregulação da sinalização de TGFB2 tem sido associada à fibrose, ao reparo anormal de feridas e às interações tumor–estroma, tornando-o relevante para estudos de fenótipos impulsionados pelo microambiente. Em modelos celulares humanos, a perturbação de TGFB2 dá suporte à análise mecanística da dinâmica da via de TGF-β e de programas regulatórios gênicos a jusante.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TGFβ2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TGFB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TGFB2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TGFB2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TGFβ2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TGFB2 para a investigação da sinalização de TGFβ2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TGFB2 críticos para a função TGFβ2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TGFB2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TGFβ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TGFβ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TGFB2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TGFβ2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TGFβ2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TGFB2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TGFB2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.