TFIIF RAP 74 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405237

Visão geral

GTF2F1 codifica a subunidade de 74 kDa do fator de transcrição IIF (TFIIF), também conhecida como TFIIF RAP 74, um componente central da maquinaria geral de transcrição da RNA polimerase II. O TFIIF estabiliza o complexo de pré-iniciação em conjunto com TFIIB e TFIIE, dá suporte ao escape do promotor e modula o alongamento da transcrição, ao mesmo tempo em que ajuda a coordenar a transcrição com o processamento co-transcricional de RNA. Por meio dessas atividades, GTF2F1 contribui para o controle global da expressão gênica, a progressão do ciclo celular e as respostas ao estresse de replicação ou de transcrição. A regulação alterada de fatores gerais de transcrição e da dinâmica da Pol II é frequentemente associada a programas proliferativos desregulados e instabilidade genômica, tornando GTF2F1 um nó útil para estudos mecanísticos em biologia do câncer e em fenótipos de doenças ligados à transcrição.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TFIIF RAP 74 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GTF2F1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GTF2F1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GTF2F1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TFIIF RAP 74.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GTF2F1 para a investigação da sinalização de TFIIF RAP 74, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GTF2F1 críticos para a função TFIIF RAP 74
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GTF2F1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TFIIF RAP 74 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TFIIF RAP 74 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GTF2F1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TFIIF RAP 74 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TFIIF RAP 74 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GTF2F1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GTF2F1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.