Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
TFII-I Double Nickase Plasmid (h): sc-403153-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TFII-I Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TFII-I Double-Nickase-Plasmid (h) und TFII-I Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GTF2I abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TFII-I: sc-46670
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TFII-I Double Nickase Plasmid (h) | sc-403153-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFII-I Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403153-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2I kodiert TFII-I, einen multifunktionalen Transkriptionsfaktor, der signalabhängige Eingänge mit Genexpressionsprogrammen koppelt, indem er an Promotorelemente bindet und calcium- sowie wachstumsfaktorresponsive Signalwege integriert. TFII-I ist an der Regulation von Immediate-Early-Genen, Zellzyklus- und Differenzierungsprogrammen beteiligt und trägt zur Koordination der Transkription mit nukleären Signalkomplexen bei. Veränderte GTF2I-Aktivität und -Dosierung wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und immunassoziierten transkriptionellen Zuständen in Verbindung gebracht; zudem deuten wiederkehrende genetische Veränderungen darauf hin, dass TFII-I-abhängige Netzwerke an krankheitsassoziiertem regulatorischem Remodeling beteiligt sind. Diese Eigenschaften machen TFII-I zu einem nützlichen Knotenpunkt, um transkriptionelle Kontrolle, stimulusresponsive Genregulation und kontextspezifische regulatorische Schaltkreise in menschlichen Zellen zu untersuchen.
TFII-I Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GTF2I-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GTF2I abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GTF2I-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GTF2I-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.