TFE3 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-437344-ACT

Das Mausgen **Tfe3** kodiert den Transkriptionsfaktor **TFE3**, ein Mitglied der MiT/TFE-Familie, das an E-Box-Motive bindet, um Programme zu koordinieren, die die Lysosomenbiogenese, Autophagie, den zellulären Stoffwechsel und die Anpassung an Stress steuern. TFE3 integriert Nährstoffsensorik-Signale, einschließlich einer mTORC1-abhängigen Regulation, um transkriptionelle Outputs zu modulieren, die mit endolysosomalem Transport und mitochondrialer Homöostase verknüpft sind. Eine dysregulierte TFE3-Aktivität wurde in Modellen der Tumorentstehung mit verändertem katabolem Flux, aberranter Immun- und Entzündungssignalgebung sowie onkogener transkriptioneller Reprogrammierung in Verbindung gebracht. In der biomedizinischen Forschung wird **Tfe3** häufig wegen seiner Rolle in TFEB/TFE3-gesteuerten lysosomalen Gennetzwerken, metabolischem Remodeling und kontextabhängigen Effekten auf Proliferation und Differenzierung untersucht.

TFE3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Tfe3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TFE3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Tfe3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Tfe3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TFE3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Tfe3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TFE3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TFE3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Tfe3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.