Partículas Lentivirales de Activación (m2) TF: sc-420268-LAC-2

El gen murino F3 codifica el factor tisular (TF), un iniciador transmembrana de la vía extrínseca de la coagulación que se une al factor VII/VIIa para promover la activación posterior del factor X y la generación de trombina. Más allá de la hemostasia, la señalización de TF se integra con vías dependientes de los receptores activados por proteasas (PAR) para influir en la inflamación, el remodelado vascular y la migración celular en contextos endoteliales y mieloides. La expresión desregulada de F3/TF se ha implicado en trombosis patológica, coagulopatía asociada a sepsis y actividad procoagulante asociada a tumores, lo que lo convierte en un nodo clave que vincula la coagulación con las respuestas de la inmunidad innata. La edición génica de F3 en ratón respalda estudios mecanísticos del ensamblaje de factores de coagulación, la señalización de PAR impulsada por TF y modelos in vivo para evaluar fenotipos tromboinflamatorios y respuestas a la lesión vascular.

Las partículas de activación lentiviral TF (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de F3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TF (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción F3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TF. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo F3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.