TF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401060-ACT

Das humane Gen **F3** kodiert den Gewebefaktor (**Tissue Factor, TF**), ein transmembranes Glykoprotein, das die extrinsische Gerinnungskaskade initiiert, indem es Faktor VII/VIIa bindet und die nachgeschaltete Thrombinbildung sowie die Fibrinbildung fördert. Über die Hämostase hinaus beeinflusst TF die Zellsignalübertragung über proteaseaktivierte Rezeptor-(PAR)-Signalwege und kann Entzündungsprozesse, die Aktivierung des Endothels und die vaskuläre Integrität modulieren. Die F3-Expression wird durch zytokin- und stressresponsive Programme reguliert und verknüpft so die TF-Aktivität mit dem Zusammenspiel von Immun- und Gerinnungssystem sowie mit Gewebeschädigungsreaktionen. Fehlregulierte TF-Spiegel und -Signalwege werden mit thromboinflammatorischen Zuständen und tumorassoziierter prokoagulatorischer Aktivität in Verbindung gebracht, was **F3** zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in der Gefäßbiologie und in krebsassoziierten Signalwegen macht.

TF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen F3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des F3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der F3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native F3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem F3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.