Plasmide Double Nickase (h) TET3: sc-414997-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TET3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TET3 Double Nickase (h) et le plasmide TET3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TET3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TET3 Antibody (D-7): sc-518126
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TET3 | sc-414997-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **TET3** code une dioxygénase dépendante du **Fe(II)** et du **2‑oxoglutarate**, qui catalyse l’oxydation itérative de la **5‑méthylcytosine** en **5‑hydroxyméthylcytosine** puis en dérivés ultérieurs, contribuant à la déméthylation active et passive de l’ADN. Cette activité façonne la programmation épigénétique, l’accessibilité de la chromatine et le contrôle transcriptionnel au cours du développement précoce, de la maturation neuronale et de la reprogrammation cellulaire, et s’articule avec des processus liés à la réparation de l’ADN et à la réplication. Une hydroxyméthylation dépendante de TET3 dérégulée a été impliquée dans des programmes d’expression génique altérés observés dans des phénotypes neurodéveloppementaux et dans la biologie tumorale, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la dynamique de l’épigénome.
TET3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TET3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TET3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TET3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TET3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.