Plasmide Double Nickase (h) TET1: sc-400845-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TET1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TET1 Double Nickase (h) et le plasmide TET1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TET1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TET1 Antibody (4F4): sc-293186
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TET1 | sc-400845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TET1 | sc-400845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TET1 code une dioxygénase des méthylcytosines qui catalyse l’oxydation progressive de la 5‑méthylcytosine en 5‑hydroxyméthylcytosine, puis en dérivés davantage oxydés, contribuant à la déméthylation active et passive de l’ADN. En modulant les paysages de méthylation des CpG, TET1 participe à la régulation transcriptionnelle, à l’activité des enhancers et aux transitions d’état de la chromatine qui orientent les décisions de destinée cellulaire et les programmes de développement. TET1 s’intègre à des réseaux de régulation épigénétique impliquant les ADN méthyltransférases, des composants de la réparation par excision de base et des modificateurs de la chromatine, afin de maintenir une plasticité épigénomique à l’échelle du génome. Une activité altérée de TET1 ou une distribution anormale de la 5hmC est associée à une dérégulation de l’expression génique observée en cancérologie, dans les processus neurodéveloppementaux et lors de la différenciation des cellules immunitaires, ce qui en fait un point d’entrée pertinent pour des études mécanistiques de l’instabilité épigénétique.
TET1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TET1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TET1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TET1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TET1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.