Plasmide CRISPR d'Activation (h) TERT: sc-400316-ACT

Le gène TERT humain code la transcriptase inverse de la télomérase, la sous-unité catalytique de la télomérase qui allonge les répétitions télomériques afin de maintenir l’intégrité des extrémités chromosomiques et de permettre une capacité de réplication à long terme. L’activité de TERT s’articule avec le réseau de maintenance des télomères, incluant la régulation par le complexe shelterin, les réponses au stress de réplication de l’ADN et les voies de signalisation des dommages à l’ADN telles qu’ATM/ATR, qui sont activées lorsque les télomères deviennent dysfonctionnels. Une expression dérégulée de la télomérase contribue à une sénescence cellulaire altérée, à l’instabilité génomique et à des phénotypes d’immortalisation, tandis que des perturbations héréditaires ou acquises de la biologie des télomères sont associées à divers troubles caractérisés par un raccourcissement prématuré des télomères. En tant que nœud central de l’homéostasie des télomères, TERT est largement étudié dans des modèles d’autorénouvellement des cellules souches, de vieillissement réplicatif et de maintenance du génome pilotée par les télomères.

TERT Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TERT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TERT Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TERT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TERT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TERT. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TERT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TERT au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TERT dans les cellules tumorales présentant une expression de TERT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.