Plasmide CRISPR d'Activation (h) Teneurin-1: sc-408663-ACT

Le gène humain **TENM1** code la téneurine‑1, une grande glycoprotéine transmembranaire de type II, enrichie dans le système nerveux, qui assure l’adhésion cellule‑cellule et une signalisation dépendante du contact lors du guidage axonal, de l’organisation des synapses et de la formation des circuits neuronaux. La téneurine‑1 participe aux interactions avec la matrice extracellulaire et à des programmes de reconnaissance trans‑synaptique qui façonnent la croissance des neurites et la connectivité, en s’intégrant à des réseaux de signalisation du développement qui régulent le remodelage du cytosquelette et l’état transcriptionnel. Des altérations génétiques et d’expression de **TENM1** ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à la biologie tumorale, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de la différenciation neuronale, de la migration et des communications cellulaires aberrantes. Ces propriétés font de **TENM1** une cible utile pour disséquer les voies qui gouvernent le développement neural et les changements, pertinents pour la maladie, de l’adhésion et de la signalisation cellulaires.

Teneurin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TENM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Teneurin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TENM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TENM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Teneurin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TENM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Teneurin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Teneurin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TENM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.