Tenascin-R CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402968-ACT

TNRは、テネイシンR（Tenascin-R）をコードする遺伝子であり、中枢神経系に豊富に存在する細胞外マトリックス糖タンパク質です。神経発生期および成体のシナプス構築において、細胞—細胞間および細胞—マトリックス間相互作用を調節します。テネイシンRは、プロテオグリカンや他のマトリックス成分との接着・シグナル伝達を協調させることで、軸索誘導、神経突起伸長、髄鞘化、ならびに周ニューロンネット（perineuronal net）の構造形成に寄与します。これらの機能を通じて、神経可塑性、抑制性回路の成熟、グリア—ニューロン間コミュニケーションに影響し、神経発達疾患や神経変性疾患の生物学においてしばしば研究対象となる過程に関与します。TNRの制御異常に関連する細胞外マトリックスのリモデリングや周ニューロンネット動態の変化は、てんかん、精神疾患、損傷に伴う可塑性に関する研究とも関連しますが、臨床的な転帰を示唆するものではありません。

Tenascin-R CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tenascin-R CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tenascin-Rの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTenascin-R依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTenascin-R経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。