TEM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427713

概要

Cd248 は腫瘍血管内皮マーカー1（TEM1）をコードしており、活性化したペリサイト、間質性線維芽細胞、ならびに血管関連の間葉系細胞に豊富に発現するI型膜貫通型糖タンパク質である。マウス組織においてTEM1は、細胞—マトリックス相互作用や血管周囲のリモデリングに関与し、細胞外マトリックスの構築、接着動態、移動プログラムに関連するシグナルを統合して、血管新生性および線維化性の微小環境を支える。Cd248 の発現は、炎症性および腫瘍性の状況における間質活性化としばしば関連しており、ペリサイト—内皮細胞間のクロストークの変化が血管の安定化や組織リモデリングに影響し得る。そのため、Cd248 は腫瘍間質の生物学、創傷修復、線維化関連経路のモデルにおいて広く研究されている。

TEM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCd248遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cd248内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cd248のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TEM1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TEM1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cd248欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TEM1の機能に不可欠なCd248エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cd248ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TEM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTEM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cd248遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TEM1 HDRプラスミド（m）および TEM1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCd248ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCd248標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。