Telethonin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402317

概要

TCAPは、チチン（TTN）に結合するZディスクタンパク質であるテレトニンをコードしており、サルコメアの組み立て、メカノセンシング（機械刺激の感知）、および横紋筋の構造的安定性に寄与します。テレトニンは、収縮装置をユビキチン‐プロテアソーム系による分解（ターンオーバー）やストレス応答性リモデリングを含むタンパク質品質管理経路へとつなぐ、張力依存的なシグナル伝達ネットワークに関与します。TCAPの破綻は筋原線維の完全性を損ない、遺伝学的・機能的研究において、遺伝性心筋症および筋ジストロフィー様表現型との関連が報告されています。筋特異的な足場（スキャフォールド）タンパク質として、テレトニンは心筋細胞の分化、サルコメアの維持、ならびに生体力学的ストレスへの適応に関して広く研究されています。

Telethonin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTCAP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TCAP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TCAPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Telethoninタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Telethoninシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TCAP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Telethoninの機能に不可欠なTCAPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TCAPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Telethonin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTelethonin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TCAP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Telethonin HDRプラスミド（h）および Telethonin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTCAPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTCAP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。