Telethonin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402317

Panoramica

TCAP codifica la telethonina, una proteina del disco Z che si lega alla titina (TTN) e contribuisce all’assemblaggio del sarcomero, alla meccanosensibilità e alla stabilità strutturale del muscolo striato. La telethonina partecipa a reti di segnalazione dipendenti dalla tensione che collegano l’apparato contrattile alle vie di controllo della qualità proteica, inclusi il turnover mediato dal sistema ubiquitina–proteasoma e il rimodellamento in risposta allo stress. L’alterazione di TCAP compromette l’integrità miofibrillare ed è stata associata a cardiomiopatie ereditarie e a fenotipi di distrofia muscolare in studi genetici e funzionali. In quanto scaffold ristretto al muscolo, la telethonina è ampiamente studiata nella differenziazione dei cardiomiociti, nel mantenimento del sarcomero e nell’adattamento allo stress biomeccanico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Telethonin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TCAP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TCAP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TCAP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Telethonin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TCAP per lo studio della segnalazione di Telethonin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TCAP critici per la funzione di Telethonin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TCAP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Telethonin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Telethonin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TCAP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Telethonin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Telethonin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TCAP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TCAP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.