TECK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422841

概要

Ccl25は、胸腺で発現するケモカイン（TECK）をコードしており、CCR9を主要な受容体としてシグナルを伝えるCCケモカインである。TECKはCCR9陽性白血球の走化性移動と局在化を誘導する。マウスでは、TECKは胸腺微小環境および粘膜組織内における免疫細胞トラフィッキングに寄与し、リンパ球のホーミング、組織監視、ならびに局所免疫の編成を形成する。下流のシグナル伝達では、PI3K/AKTやMAPKカスケードなど、GPCR依存性経路が関与し、細胞運動、接着、細胞骨格リモデリングを制御する。Ccl25–CCR9軸の活性が破綻すると、炎症性の免疫細胞浸潤やリンパ球局在の変化が生じ得ることが示唆されており、粘膜炎症や腫瘍関連の免疫細胞分布モデルに関連づけられている。

TECK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcl25遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccl25内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccl25のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TECKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TECKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccl25欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TECKの機能に不可欠なCcl25エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccl25ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TECK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTECK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccl25遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TECK HDRプラスミド（m）および TECK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcl25ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcl25標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。