Tec CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402051-ACT

Das humane Gen **TEC** kodiert Tec, eine nichtrezeptorische Tyrosinkinase aus der Tec-Familie, die Signale stromabwärts von Immunrezeptoren vermittelt, darunter der B‑Zell‑Rezeptor und Fc‑Rezeptoren. Tec integriert Phosphorylierungsereignisse, die die Aktivierung der Phospholipase C‑γ, den Kalziumfluss, das PI3K‑AKT‑Signalweg sowie MAPK‑Signalwege beeinflussen und dadurch Aktivierung, Differenzierung und Zytokinantworten von Lymphozyten prägen. Eine Fehlregulation der TEC‑abhängigen Signalübertragung wurde mit aberranter Funktion von Immunzellen und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was TEC zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung rezeptorproximaler Kinasenetzwerke macht. TEC wird zudem als Pathway‑Readout in systembiologischen Analysen des Crosstalks der Immun-Signalübertragung und der transkriptionellen Umprogrammierung genutzt.

Tec Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TEC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Tec Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TEC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TEC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Tec-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TEC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Tec-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Tec-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TEC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.