TdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406822

概要

DNTTは終末デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（TdT）をコードしており、TdTはリンパ球の発生過程におけるV(D)J再構成中間体に、鋳型に依存しないヌクレオチドを付加する特殊なDNAポリメラーゼである。免疫グロブリンおよびT細胞受容体遺伝子座での接合部多様性を増大させることで、TdTは抗原受容体レパートリーを形成し、適応免疫の特異性に寄与する。TdT活性は、再構成シグナル配列で生じるDNA二本鎖切断修復過程および末端結合（エンドジョイニング）事象と密接に関連している。DNTTの異常発現は未熟なリンパ系状態のマーカーとして広く用いられており、白血病発生、ゲノム不安定性、系統決定といった文脈で頻繁に研究されている。

TdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDNTT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DNTT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DNTTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TdTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TdTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DNTT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TdTの機能に不可欠なDNTTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DNTTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DNTT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TdT HDRプラスミド（h）および TdT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDNTTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDNTT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。