TDP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405057

概要

チロシルDNAホスホジエステラーゼ1（TDP1）は核内のDNA修復酵素であり、トポイソメラーゼIがDNA上に捕捉された際に形成される共有結合性の3′-ホスホチロシル結合（3′-phosphotyrosyl linkages）や、その他の損傷によりブロックされた3′側DNA末端を加水分解します。PARP1、XRCC1、DNAリガーゼIIIとの相互作用を含む一本鎖切断修復（SSBR）および塩基除去修復（BER）経路と協調することで、TDP1はリガーゼで連結可能な末端の再生を助け、転写および複製ストレス下でゲノム安定性を維持します。TDP1の欠失または機能低下はTop1-DNA付加体の解消を阻害し、DNA鎖切断や複製関連損傷の蓄積を増加させます。TDP1の機能不全は、軸索ニューロパチーを伴う脊髄小脳失調症などの神経変性表現型と関連しており、DNA損傷耐性や遺伝毒性ストレスに対する細胞応答の研究に広く関係します。

TDP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTDP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TDP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TDP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TDP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TDP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TDP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TDP1の機能に不可欠なTDP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TDP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TDP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTDP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TDP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TDP1 HDRプラスミド（h）および TDP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTDP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTDP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。