Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) TDG: sc-416599-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TDG consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TDG (h) y el plásmido de doble nickasa TDG (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TDG. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TDG Anticuerpo (D-11): sc-376652
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TDG | sc-416599-NIC | 20 µg | $410.00 |
La glicosilasa de ADN de timina (TDG) es una enzima de reparación por escisión de bases que elimina timina o uracilo de desajustes G:T y G:U originados por la desaminación de 5-metilcitosina, ayudando a preservar la integridad del genoma. Más allá de la reparación canónica, TDG contribuye a la desmetilación activa del ADN al procesar derivados oxidados de la 5-metilcitosina en conjunto con las enzimas TET, lo que la vincula con la regulación epigenética de la transcripción. A través de estas actividades, TDG influye en la reparación acoplada a la replicación y a la transcripción, el estado de la cromatina y las respuestas celulares al daño del ADN. La alteración de la función o la regulación de TDG se estudia con frecuencia en el contexto de la carga mutacional, la inestabilidad del epigenoma y programas de expresión génica asociados al cáncer.
TDG El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TDG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TDG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TDG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TDG alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.