TDG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423321

概要

マウスTDG（チミンDNAグリコシラーゼ）は塩基除去修復（BER）酵素であり、グアニンと誤対合したチミンまたはウラシルを認識して切り出すことで、脱アミノ化や複製エラーに由来するG:Tミスマッチの解消に寄与します。TDGはまた、TET酵素によって生成される酸化型5-メチルシトシン誘導体を処理することで能動的DNA脱メチル化にも関与し、エピジェネティック制御やクロマチン関連の転写制御と結び付いています。これらの作用を通じて、TDGはゲノム安定性、DNAメチル化パターンの維持、ならびにDNA損傷に対する細胞応答に貢献します。TDG機能の変化は、エピジェネティック状態の破綻や変異形成過程の異常と関連することが報告されており、がん生物学、発生プログラム、炎症に関連したゲノム維持機構の研究において重要です。

TDG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTdg遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tdg内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tdgのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TDGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TDGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tdg欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TDGの機能に不可欠なTdgエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tdgゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TDG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTDG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tdg遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TDG HDRプラスミド（m）および TDG HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTdgホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTdg標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。