Plasmide CRISPR d'Activation (h) TBX4: sc-405242-ACT

TBX4 code un facteur de transcription de la famille T-box, qui se lie à l’ADN via un domaine T-box conservé afin de réguler des programmes d’expression génique du développement. En biologie humaine, TBX4 est un acteur clé de la morphogenèse du membre postérieur et de la différenciation mésenchymateuse, en coordonnant des réseaux transcriptionnels qui s’entrecroisent avec les voies de signalisation FGF, WNT, BMP et SHH lors de la mise en place des patrons et de la spécification tissulaire. Des altérations du dosage de TBX4 ou de son activité régulatrice ont été associées à des malformations congénitales des membres et à des maladies vasculaires pulmonaires pédiatriques, reflétant son rôle dans les voies du développement et de l’organogenèse. En tant que régulateur nucléaire, TBX4 est fréquemment étudié pour ses effets sur l’engagement de lignée, les circuits transcriptionnels et le contrôle des interactions entre enhancers et promoteurs.

TBX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TBX4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TBX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TBX4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TBX4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TBX4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TBX4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TBX4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TBX4 dans les cellules tumorales présentant une expression de TBX4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.