TBCK Lentiviral Activation Particles (h): sc-409581-LAC

TBCK (TBC1-domain containing kinase) ist ein multifunktioneller Signalregulator, der an der Kontrolle von Zellwachstum und intrazellulärem Transport beteiligt ist und dem Rollen bei der Modulation der Aktivität des mTOR-Signalwegs sowie der Homöostase des Autophagie-Lysosomen-Systems zugeschrieben werden. Das Protein enthält Domänen, die zu GTPase-regulatorischen und Scaffold-Funktionen passen, und unterstützt damit die Koordination von Membrandynamik und Proteostase in metabolisch aktiven Zellen. Störungen von TBCK wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und einer erhöhten Anfälligkeit für zellulären Stress in Verbindung gebracht, was ein Gleichgewicht TBCK-abhängiger Signalprozesse mit der Erhaltung von Neuronen verknüpft. Diese Eigenschaften machen TBCK zu einem relevanten Ziel für Studien zur Wachstumskontrolle, endolysosomalen Funktion und zum Crosstalk von Signalwegen in humanen Zellmodellen.

TBCK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TBCK-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TBCK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TBCK-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TBCK-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TBCK-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.