TBCK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409581-ACT

TBCK（TBC1ドメイン含有キナーゼ）は、膜輸送や増殖制御に関与するとされる多ドメイン型の細胞質レギュレーターをコードしており、Rab GTPase関連プロセスや、細胞恒常性に影響を及ぼすシグナル伝達ネットワークにおける役割が報告されています。ヒトTBCKは、mTOR関連経路やオートファジー／リソソーム機能の調節との関連が示されており、細胞サイズ、代謝、ストレス応答を制御する機構と結び付けられています。TBCK活性の変化は、神経発達性の表現型や症候群性疾患と関連づけられており、神経細胞の維持、プロテオスタシス、シグナル異常の研究における重要性を支持します。これらの特性により、TBCKは細胞内輸送およびシグナル経路間クロストークの機構解析に有用な標的となります。

TBCK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBCKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBCK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBCK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBCK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBCKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBCK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBCK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBCK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBCK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。