TASK-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403477-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TASK-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TASK-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und TASK-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNK3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TASK-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403477-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TASK-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403477-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNK3 kodiert TASK-1 (K2P3.1), einen Kaliumkanal mit zwei Porendomänen, der Hintergrund‑K⁺‑Leckströme erzeugt, um das Ruhemembranpotenzial zu stabilisieren und die zelluläre Erregbarkeit feinzujustieren. Die Aktivität von TASK-1 wird durch den extrazellulären pH-Wert, Lipid‑Signalwege und GPCR‑gekoppelte Signalwege reguliert, die die Membranleitfähigkeit und nachgeschaltete Ca²⁺‑abhängige Signalprozesse modulieren. In menschlichen Geweben trägt TASK-1 zur elektrophysiologischen Kontrolle in kardialen und pulmonal-vaskulären Zellen sowie in Neuronen bei und beeinflusst dabei Prozesse wie die Repolarisation des Aktionspotenzials, die Regulation des Gefäßtonus und die Reiz‑Sekretions‑Kopplung. Eine dysregulierte KCNK3/TASK-1‑Funktion wurde mit veränderten kardiopulmonalen und neurophysiologischen Phänotypen in Verbindung gebracht und ist damit ein nützliches Ziel für mechanistische Studien ionenkanalabhängiger Signalnetzwerke.
TASK-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNK3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNK3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNK3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNK3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.