Plasmide CRISPR d'Activation (h) TARSL1: sc-410152-ACT

Le gène humain TARS2 code une thréonyl‑ARNt synthétase mitochondriale, nécessaire au chargement de l’ARNt mitochondrial de la thréonine (mt‑ARNt(Thr)) et au maintien de la fidélité de la traduction mitochondriale. En soutenant la synthèse des sous-unités de la phosphorylation oxydative (OXPHOS), l’activité de TARSL1/TARS2 est étroitement liée à la protéostasie mitochondriale, au fonctionnement de la chaîne respiratoire et au métabolisme énergétique cellulaire. Toute perturbation de cet axe peut remodeler la signalisation intégrée de stress ainsi que les voies de communication mitochondrie–noyau, qui influencent la prolifération et la survie. Une traduction mitochondriale et une OXPHOS dérégulées constituent des caractéristiques récurrentes dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuromusculaires, ainsi que dans le métabolisme tumoral, ce qui fait de TARS2 un nœud pertinent pour des études mécanistiques du dysfonctionnement mitochondrial.

TARSL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TARS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TARSL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TARS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TARS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TARSL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TARS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TARSL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TARSL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TARS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.