TARC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422837

概要

Ccl17は、胸腺・活性化調節性ケモカイン（TARC/CCL17）をコードしています。TARC/CCL17は分泌型のCCケモカインで、CCR4に結合し、Th2細胞や制御性T細胞などCCR4陽性T細胞サブセットの走化性を誘導します。マウスの免疫組織においてTARCは白血球のトラフィッキングに寄与し、炎症性浸潤細胞の組成や極性化を形成するとともに、抗原依存性の応答を協調的に制御します。Ccl17の発現は、骨髄系細胞および間質系コンパートメントにおけるサイトカインシグナル伝達やパターン認識受容体の活性化の下流で誘導されることが多く、自然免疫由来のシグナルを適応免疫細胞のリクルートへと結び付けます。Ccl17/TARCシグナルの破綻は、アレルギー様炎症や免疫介在性病態と関連しており、ケモカイングラジエント、バリア炎症、T細胞―骨髄系細胞のクロストークを研究する上で有用な結節点となります。

TARC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcl17遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccl17内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccl17のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TARCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TARCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccl17欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TARCの機能に不可欠なCcl17エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccl17ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TARC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTARC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccl17遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TARC HDRプラスミド（m）および TARC HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcl17ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcl17標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。