Plásmido Doble Nickase (m) TAP2: sc-423266-NIC

Mouse Tap2 codifica TAP2, un transportador de la familia ABC (ATP-binding cassette) que forma un heterodímero con TAP1 para translocar péptidos derivados del proteasoma desde el citosol hacia el retículo endoplásmico, donde se cargan en moléculas del MHC de clase I. Este paso de transporte es fundamental para el procesamiento y la presentación de antígenos, e integra vías de degradación proteasomal, carga de péptidos en el RE y vigilancia inmunitaria. La alteración de la actividad de TAP2 puede remodelar el inmunopeptidoma e influir en la expresión de MHC I en la superficie celular, lo que repercute en estudios de interacciones hospedador–patógeno, mecanismos de evasión inmune tumoral e inflamación impulsada por la inmunidad en modelos experimentales. Por ello, Tap2 se utiliza ampliamente como un nodo genético para analizar programas de presentación de antígenos sensibles al interferón y determinantes del reconocimiento por células T.

TAP2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tap2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tap2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tap2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tap2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.