TAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423266

Übersicht

Tap2 kodiert den mausartigen „Transporter Associated with Antigen Processing 2“ (TAP2), einen ATP-bindenden Kassettentransporter (ABC-Transporter), der mit TAP1 ein Heterodimer bildet, um aus dem Proteasom stammende Peptide aus dem Zytosol in das endoplasmatische Retikulum zu translozieren, wo sie auf MHC‑Klasse‑I‑Moleküle geladen werden. Diese Aktivität ist zentral für die Antigenverarbeitung und -präsentation und verknüpft den Ubiquitin‑Proteasom‑Abbau, die Peptidbeladung im ER und die Immunüberwachung durch CD8+‑T‑Zellen. Die TAP2‑Funktion ist in den Peptid‑Loading‑Komplex integriert und beeinflusst Qualität und Diversität des MHC‑I‑Immunopeptidoms, wodurch sie die Reaktionen auf Infektionen und immunvermittelten Stress mitprägt. Eine veränderte TAP2‑Aktivität wurde mit einer verminderten MHC‑I‑Oberflächenexpression und Immunflucht‑Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Entzündungsbiologie und die Krebsimmunologie relevant sind.

Das TAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tap2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tap2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tap2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TAP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tap2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TAP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tap2-Exone abzielen, die für die TAP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tap2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tap2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TAP2 HDR-Plasmid (m) und TAP2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tap2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tap2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.