TAO2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402320-ACT

ヒトTAOK2は、Ste20ファミリーに属するセリン/スレオニンキナーゼであるTAO2をコードしており、MAPKシグナル伝達の上流、特にストレス応答性のJNKおよびp38経路で機能する。TAO2は細胞骨格の再編成や微小管の組織化に寄与し、細胞外ストレスや遺伝毒性ストレスといった刺激を、細胞形態、遊走、ならびに生存プログラムの変化へと結び付ける。神経細胞では、TAOK2活性が樹状突起およびスパインの発達やシナプスシグナル伝達に関与することが示されており、神経発達回路における役割が支持されている。TAOK2シグナルの破綻や遺伝子座の変異は、神経発達関連の表現型やストレス応答シグナルの変化と関連づけられており、脳および細胞ストレス生物学における機序解明研究の重要なノードとなっている。

TAO2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TAOK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TAO2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TAOK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTAOK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TAO2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTAOK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTAO2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTAOK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTAO2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。