Tachykinin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400690-ACT

TAC1はタキキニン前駆体ペプチドをコードしており、これらはサブスタンスPやニューロキニンAなどの神経活性リガンドへとプロセシングされます。これらのリガンドは主にニューロキニン受容体を介してシグナル伝達し、神経伝達、侵害受容、神経原性炎症、平滑筋トーヌスの調節に関与します。タキキニンのシグナル伝達は、ホスホリパーゼC/IP3–Ca²⁺フラックス、PKC活性化、MAPK/ERKカスケードなどのGタンパク質共役受容体（GPCR）経路を介して進行し、サイトカイン放出や神経細胞の興奮性に影響を与えます。ヒト組織では、TAC1の発現は感覚ニューロンで高く、特定の神経内分泌および免疫の状況でも認められることから、炎症回路や神経—免疫クロストークとの関連が示唆されます。タキキニン経路の異常は、文献上、慢性疼痛、気道過敏性、消化管運動障害、神経炎症過程などとの関連が報告されており、経路調節に関する機序研究を支持します。

Tachykinin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TAC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tachykinin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TAC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTAC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tachykininの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTAC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTachykinin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTAC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTachykinin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。