T1-cadherin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401986-ACT

CDH9 codifica la T1-caderina, una molecola di adesione cellula–cellula calcio-dipendente della superfamiglia delle caderine che contribuisce al patterning tissutale e al mantenimento delle giunzioni intercellulari. Attraverso legami omofilici e il collegamento all’organizzazione del citoscheletro, CDH9 influenza la polarità cellulare, la migrazione e i programmi di crescita dei neuriti, che si intersecano con la segnalazione dello sviluppo e con il controllo della crescita mediato dal contatto. Profili di espressione alterati delle caderine possono spostare l’equilibrio tra stati di adesione e motilità e rimodellare gli ambienti di segnalazione locali, rendendo CDH9 un nodo utile per studiare i meccanismi alla base dell’invasione cellulare, della differenziazione e della formazione di reti. Nella biologia umana, la deregolazione di CDH9 è stata esaminata in contesti in cui adesione e connettività risultano perturbate, inclusi processi neuroevolutivi e associati al cancro.

T1-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

T1-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di T1-cadherin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da T1-cadherin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via T1-cadherin nelle cellule tumorali con espressione di CDH9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.