Plasmide CRISPR d'Activation (h) T1-cadherin: sc-401986-ACT

CDH9 code la T1‑cadhérine, une molécule d’adhérence cellule‑cellule dépendante du calcium appartenant à la superfamille des cadhérines, qui contribue à la mise en place de l’architecture tissulaire et au maintien des jonctions intercellulaires. Par des interactions homophiles et son couplage à l’organisation du cytosquelette, CDH9 influence la polarité cellulaire, la migration et les programmes d’extension des neurites, en interaction avec la signalisation du développement et le contrôle de la croissance médié par le contact. Des profils d’expression des cadhérines modifiés peuvent faire basculer l’équilibre entre adhérence et motilité et remodeler les environnements locaux de signalisation, ce qui fait de CDH9 un point d’entrée utile pour étudier les mécanismes à l’origine de l’invasion cellulaire, de la différenciation et de la formation de réseaux. En biologie humaine, la dérégulation de CDH9 a été examinée dans des contextes où l’adhérence et la connectivité sont perturbées, notamment dans des processus neurodéveloppementaux et associés au cancer.

T1-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

T1-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de T1-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de T1-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie T1-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.