Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
T-type Ca++ CP α1H CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401147-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- T-type Ca++ CP α1H CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- T-type Ca++ CP α1H CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom T-type Ca++ CP α1H CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom T-type Ca++ CP α1H CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der CACNA1H-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: T-type Ca++ CP α1H: sc-377510
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
T-type Ca++ CP α1H CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-401147-ACT | 20 µg | $397.00 |
CACNA1H kodiert die porenbildende α1H‑Untereinheit des T‑Typ‑spannungsabhängigen Calciumkanals CaV3.2, der einen bei niedrigen Spannungen aktivierten Ca2+-Einstrom vermittelt und damit die unterschwellige Erregbarkeit, rhythmisches Burst‑Feuern sowie intrazelluläre, calciumabhängige Signalwege prägt. Durch die Kopplung von Membrandepolarisation an Ca2+-regulierte Signalwege beeinflusst CaV3.2 die Neurotransmitterfreisetzung, die Hormonausschüttung und calciumabhängige Transkriptionsprogramme in erregbaren wie auch nicht erregbaren Geweben. Eine abweichende CACNA1H‑Expression oder Kanalaktivität wird mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch veränderte elektrische Signalübertragung und gestörte Calciumhomöostase gekennzeichnet sind, darunter Epilepsie‑Spektrum‑Phänotypen, Schmerzsensibilisierung und Herzrhythmusstörungen. Als Knotenpunkt in Calcium‑Signalnetzwerken wird CACNA1H häufig hinsichtlich seines Beitrags zur Erregbarkeit, Ca2+-abhängigen Genregulation und Stimulus‑Antwort‑Kopplung untersucht.
T-type Ca++ CP α1H Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CACNA1H-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
T-type Ca++ CP α1H Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CACNA1H-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CACNA1H-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen T-type Ca++ CP α1H-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CACNA1H-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von T-type Ca++ CP α1H-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des T-type Ca++ CP α1H-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CACNA1H-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.