Syntaxin 11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404809-ACT

STX11 kodiert Syntaxin 11, ein t‑SNARE-Protein, das das Andocken von Vesikeln sowie Membranfusionsereignisse reguliert, die für die regulierte Exozytose und den endosomalen Transport essenziell sind. In Immunzellen unterstützt Syntaxin 11 die Freisetzung zytotoxischer Granula und trägt zu einer koordinierten Dynamik sekretorischer Lysosomen bei, die antivirale und antitumorale Antworten prägt. Eine Störung der STX11‑abhängigen Membranfusion beeinträchtigt die Granulareifung und Degranulationswege und ist nachweislich relevant für primäre Immundefizienz-Phänotypen, die mit einer defekten Lymphozyten-Zytotoxizität einhergehen. Als Bestandteil SNARE‑vermittelter Transportnetzwerke wird Syntaxin 11 zudem genutzt, um Organellenidentität, Vesikel-Tethering und die Frachtzustellung in hämatopoetischen und entzündlichen Kontexten zu untersuchen.

Syntaxin 11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STX11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Syntaxin 11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STX11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STX11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Syntaxin 11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STX11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Syntaxin 11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Syntaxin 11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STX11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.