Synoviolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403476

概要

ヒトのSYVN1は、シノビオリン（synoviolin）をコードしている。シノビオリンは小胞体（ER）に局在するRING型E3ユビキチンリガーゼであり、ER関連分解（ERAD）の中核構成要素として機能し、ミスフォールド（誤折り畳み）タンパク質をユビキチン化してプロテアソームによる除去を促進する。ERにおけるタンパク質品質管理を通じて、シノビオリンはプロテオスタシスの維持に寄与し、アンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル伝達を調節することで、ERストレスを下流の炎症および細胞生存経路に結び付ける。SYVN1の活性は、主要基質のユビキチン依存的な分解制御を介してアポトーシスや細胞周期制御の調節にも関連しており、慢性的ストレスに対する細胞の適応に影響を与える。SYVN1の発現異常やERAD能の破綻は、滑膜過形成や炎症性関節病変などの疾患関連機序、ならびにより広範なプロテオスタシス不均衡の文脈において関与が示唆されている。

Synoviolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSYVN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SYVN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SYVN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Synoviolinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Synoviolinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SYVN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Synoviolinの機能に不可欠なSYVN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SYVN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Synoviolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSynoviolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SYVN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Synoviolin HDRプラスミド（h）および Synoviolin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSYVN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSYVN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。