Synaptotagmin II CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423244

概要

Syt2はシナプトタグミンIIをコードしており、シナプス小胞のエキソサイトーシスおよび同期的な神経伝達物質放出における主要な高速Ca2+センサーとして機能する、Ca2+結合性の膜タンパク質です。シナプトタグミンIIはC2ドメインを介して、活動電位によって誘発されるCa2+流入をSNARE依存的な膜融合へと結び付け、シナプス前終末における放出確率や短期可塑性を調節します。マウスのニューロンおよび神経筋接合部では、Syt2の発現は、特定の回路や運動経路における迅速な伝達と密接に関連しています。Ca2+トリガー性の小胞融合とシナプス前放出機構の破綻（調節異常）は、シナプス機能障害が中心的特徴となる神経生理学および神経疾患メカニズムの研究に広く関連します。

Synaptotagmin II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSyt2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Syt2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Syt2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Synaptotagmin IIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Synaptotagmin IIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Syt2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Synaptotagmin IIの機能に不可欠なSyt2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Syt2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Synaptotagmin II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSynaptotagmin II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Syt2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Synaptotagmin II HDRプラスミド（m）および Synaptotagmin II HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSyt2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSyt2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。