Synaptogyrin-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403955-ACT

SYNGR3 codifica a Sinaptogirina-3, uma proteína de membrana de vesículas sinápticas enriquecida em neurônios e implicada na regulação do tráfego vesicular, da dinâmica dos reservatórios de vesículas e da liberação de neurotransmissores. Proteínas da família sinaptogirina participam da organização da membrana pré-sináptica e podem influenciar a plasticidade sináptica ao modular a reciclagem de vesículas e o acoplamento a processos de exocitose e endocitose. Alterações na função das vesículas sinápticas e na sinalização pré-sináptica são características recorrentes na biologia de doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas, tornando o SYNGR3 um alvo relevante para o estudo de mecanismos de disfunção sináptica. Como um fator associado a vesículas expresso em neurônios, o SYNGR3 é útil para dissecar vias que governam a homeostase pré-sináptica e o remodelamento sináptico dependente de atividade.

Synaptogyrin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SYNGR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Synaptogyrin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SYNGR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SYNGR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Synaptogyrin-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SYNGR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Synaptogyrin-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Synaptogyrin-3 em células tumorais com expressão de SYNGR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.