Swiprosin-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404763-ACT

EFHD2 kodiert Swiprosin-1, ein calciumbindendes Adapterprotein, das an der dynamischen Umgestaltung des Aktin-Zytoskeletts und der Koordination der Signaltransduktion an der Plasmamembran beteiligt ist. Swiprosin-1 wurde mit Prozessen wie Zellausbreitung, Adhäsion und Motilität in Verbindung gebracht, was mit Funktionen in der calciumabhängigen Signalübertragung und der Zytoskelettorganisation übereinstimmt. In immunologischen und neuronalen Kontexten wurde die EFHD2-assoziierte Regulation zellulärer Aktivierungszustände im Zusammenhang mit inflammatorischer Signalgebung sowie synaptischer oder axonaler Funktion untersucht. Veränderte EFHD2-Expressionsmuster wurden in mehreren krankheitsrelevanten Situationen beschrieben, was seine Eignung als molekularer Knotenpunkt zur Analyse von Signalwegen unterstreicht, die Calciumflüsse mit zytoskelettalen und transkriptionellen Antworten koppeln.

Swiprosin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EFHD2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Swiprosin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EFHD2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EFHD2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Swiprosin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EFHD2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Swiprosin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Swiprosin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EFHD2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.