SVCT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401350

概要

SLC23A2は、ナトリウム依存性ビタミンCトランスポーターであるSVCT2をコードしており、細胞内のレドックスバランスを維持するためにアスコルビン酸を細胞内へ取り込む高親和性の膜輸送体です。アスコルビン酸依存性ジオキシゲナーゼを支えることで、SVCT2はコラーゲン成熟、TET/JmjC酵素を介したエピジェネティック制御、さらにプロリルヒドロキシラーゼを介する低酸素シグナル伝達に影響し、その結果、細胞外マトリックスの恒常性や転写プログラムに影響を与えます。SVCT2活性はまた、代謝が活発な組織におけるミトコンドリア機能および酸化ストレス応答とも関連しています。SLC23A2の発現変動やアスコルビン酸の取り扱いの変化は、酸化傷害への感受性や、神経生物学・心血管生物学・がん細胞代謝に関連する表現型と関連づけられています。

SVCT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC23A2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC23A2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC23A2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SVCT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SVCT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC23A2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SVCT2の機能に不可欠なSLC23A2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC23A2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SVCT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSVCT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC23A2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SVCT2 HDRプラスミド（h）および SVCT2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC23A2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC23A2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。