Plasmide CRISPR d'Activation (h) SUZ12: sc-401551-ACT

SUZ12 code un composant central du complexe répressif Polycomb 2 (PRC2), qui coopère avec EZH2 et EED pour établir et maintenir des états de chromatine répressifs via la méthylation de H3K27. En modulant l’accessibilité de la chromatine, SUZ12 contribue à des programmes stables de silencing transcriptionnel qui régulent la spécification de lignée, le contrôle du cycle cellulaire et les réseaux de gènes du développement. Une activité altérée de PRC2 impliquant SUZ12 a été associée à une dérégulation épigénétique dans plusieurs contextes de cancer ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud clé dans les études sur le remodelage de la chromatine et l’homéostasie transcriptionnelle. La répression dépendante de SUZ12 recoupe des voies contrôlant la différenciation, la prolifération et les réponses aux dommages de l’ADN, via des effets étendus sur l’expression génique.

SUZ12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SUZ12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SUZ12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SUZ12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SUZ12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SUZ12. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SUZ12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SUZ12 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SUZ12 dans les cellules tumorales présentant une expression de SUZ12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.