Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sulfiredoxin: sc-403023-ACT

SRXN1 code la sulfiredoxine, une oxydoréductase ATP‑dépendante qui restaure les peroxyrédoxines hyperoxydées (Prx‑SO2H) à leur forme thiol active, maintenant ainsi l’activité peroxydase en situation de stress oxydant. En préservant le cycle des peroxyrédoxines, la sulfiredoxine soutient l’homéostasie rédox et influence des voies de signalisation sensibles aux ROS, notamment les réponses antioxydantes pilotées par Nrf2/ARE et la modulation en aval des voies MAPK et NF‑κB. L’activité de SRXN1 est associée à l’adaptation cellulaire en conditions d’hypoxie, d’inflammation et de stress protéotoxique, et une expression altérée a été rapportée dans divers contextes de biologie du cancer, de neurodégénérescence et de dysfonction métabolique, où le déséquilibre rédox constitue une caractéristique majeure. Ces propriétés font de SRXN1 un nœud d’étude pertinent pour explorer la régulation rédox des thiols, la réparation des dommages oxydatifs et les programmes transcriptionnels induits par le stress dans les cellules humaines.

Sulfiredoxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRXN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sulfiredoxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRXN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRXN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sulfiredoxin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRXN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sulfiredoxin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sulfiredoxin dans les cellules tumorales présentant une expression de SRXN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.