![Su[fu] Antibody (F-4) - Western Blotting - Image 55082The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.](https://media.scbt.com/product/sufu-double-nickase-plasmids-m-western-blotting_05_50_b_55082.jpg)
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Su[fu] Double Nickase Plasmid (m): sc-423973-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Su[fu] Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Su[fu] Double-Nickase-Plasmid (m) und Su[fu] Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sufu abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Su[fu]: sc-137014
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Su[fu] Double Nickase Plasmid (m) | sc-423973-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Su[fu] Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423973-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sufu (Suppressor of Fused) kodiert einen zentralen intrazellulären Inhibitor der Hedgehog-Signalübertragung, der GLI-Transkriptionsfaktoren hemmt und dazu beiträgt, während der embryonalen Musterbildung und der Gewebehomöostase Schwellenwerte für die Aktivierung des Signalwegs festzulegen. In Mauszellen reguliert Su[fu] die Verarbeitung von GLI, dessen nukleäre Lokalisation und den transkriptionellen Output stromabwärts von PTCH1/SMO, wodurch es mit primärzilienabhängiger Signalgebung und entwicklungsbiologischen Genprogrammen verknüpft ist. Eine Störung der SUFU-Funktion ist mit einer fehlregulierten Hedgehog-Aktivität assoziiert, die an angeborenen Fehlbildungen und tumorigenen Prozessen beteiligt ist, weshalb Sufu als häufig genutzter Knotenpunkt zur Untersuchung der Kontrolle der Signaltransduktion dient. Sufu-zentrierte Modelle unterstützen zudem die Erforschung des Cross-talks des Signalwegs mit Zellzyklusregulation, Differenzierung sowie der Aufrechterhaltung von Stamm‑/Vorläuferzellen.
Su[fu] Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sufu-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sufu abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sufu-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sufu-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.