Strumpellin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402808

概要

WASHC5はストランペリン（strumpellin）をコードしており、エンドソーム膜上でArp2/3依存的なアクチン重合を制御するWASH複合体の中核をなす必須コンポーネントです。ストランペリンは、エンドソームのチューブ形成と切断を協調させることで、レトロマー関連のカーゴ選別およびリサイクリングを支え、膜受容体や栄養輸送体の輸送動態に影響を与えます。WASHC5の活性は、細胞骨格リモデリングとエンドソーム‐形質膜経路およびエンドソーム‐ゴルジ体経路を統合し、細胞移動、シグナル伝達出力、リソソーム恒常性を規定します。WASHC5の病原性変異は、遺伝性痙性対麻痺を含む神経変性表現型と関連づけられており、神経細胞の維持や膜輸送ストレスの研究における重要性が示されています。

Strumpellin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWASHC5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WASHC5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WASHC5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Strumpellinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Strumpellinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WASHC5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Strumpellinの機能に不可欠なWASHC5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WASHC5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Strumpellin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびStrumpellin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WASHC5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Strumpellin HDRプラスミド（h）および Strumpellin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWASHC5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWASHC5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。