Stim2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403491-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Stim2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Stim2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Stim2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf STIM2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Stim2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403491-NIC | 20 µg | $410.00 |
STIM2 (stromal interaction molecule 2) kodiert einen Ca²⁺-Sensor des endoplasmatischen Retikulums, der den Füllstand der ER-Ca²⁺-Speicher mit dem Ca²⁺-Einstrom über die Plasmamembran koppelt, indem er den store-operated calcium entry (SOCE) über ORAI-Kanäle aktiviert. Durch die Feinabstimmung basaler und anhaltender Ca²⁺-Signale beeinflusst Stim2 nachgeschaltete Signalwege, darunter calcineurin–NFAT-Transkriptionsprogramme, MAPK-Signaling sowie die Ca²⁺-abhängige Regulation von Sekretion und mitochondrialer Funktion. Die STIM2-Aktivität ist für zelluläre Prozesse wie synaptische Signalübertragung, Aktivierung von Immunzellen und Stressantworten im Zusammenhang mit der ER-Homöostase relevant. Eine dysregulierte SOCE sowie veränderte STIM2-Expression oder -Funktion wurden mit neurodegenerativen Phänotypen, inflammatorischer Signalgebung und einer krebsassoziierten Umprogrammierung der Calcium-Signalwege in Verbindung gebracht, was STIM2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien macht.
Stim2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des STIM2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von STIM2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die STIM2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit STIM2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.